Leica CLSM SP8_2

Location: Takustr. 6, lab K022 (S1 area)

SN: 8100001168

FUB: 7200003638

Responsible persons & booking: https://fub.openiris.io/timeline/5a7edf14-e560-42e2-9b13-90b0062d1f96

Detailed information and protocols how to use OpenIris you find here.

Requirements e.g. device specific training & safety briefing:

Watch the video about confocal microscopy as well as the video recording of the Laser Safety briefing and the additonal Lasers Video.
Watch the OM video tutorial.
Make an appointment with your Keyuser*, to get practical training (2-3 session) & an intro.
In case you are the first person of your group who wants to use the device or in case of fuurtehher questions, contact the responsible person shown in OpenIris (https://fub.openiris.io/timeline/5a7edf14-e560-42e2-9b13-90b0062d1f96).
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Confocal Laser Scanning Microscope Leica SP8 (2)

Confocal laser scanning microscopy enables optical sectioning of multilayer fluorescent specimens with high contrast by applying a pinhole in the optics. It is therefore possible to image a thin optical slice out of a thick specimen (up to 100 µm) that represents under optimal conditions a slice of app. 500 nm.

The CLSM SP8 (2) based on a DMi8 CEL Compact allows precise detection of fluorophores in your samples. The system excites via diode lasers at 405, 488, 552, or 638 nm. The SP8(2) has two standard GaAsp photomultipliers (PMTs) and one extremely sensitive Hybrid detector (HyD), combining PMT and avalanche photodiode (APD) technology.

The system is optimized for confocal microscopy with standard dyes (DAPI, Alexa488, Alexa555/Cy3, Alexa648/Cy5, etc.) and gives, in combination with its strong and stable diode lasers, convincing results with the given limitations in excitation. The microscope is comparably easy to use as it is pretty stripped down to the components necessary for confocal microscopy in combination with the newest generation of Leica microscopes with a user-friendly touchscreen. All immersion objectives are optimized for oil immersion. „Conventional“ light-microscopy with the Trans-PMT or oculars, respectively, is rather sophisticated as, unlike for the confocal detection, objectives, aperture and filters have to be set manually. The system has no incubation chamber.

Detailed specifications CLSM Leica SP8 (2)

Microscope:

DMi8 CEL Compact stand (inverted)
Semi-Motorized scanning stage (manual xy)

Lasers:

405 nm Diode Laser
488 nm Diode Laser
552 nm Diode Laser
638 nm Diode Laser

Conventional fluorescence filters for eyepiece visualization:

Blue DAPI LP Excitation: BP 360/40 Emission: LP 425
Green FITC LP Excitation: BP 470/40 Emission: LP 515
Red RHOD LP Excitation: BP 540/45 Emission: LP 590

Condenser:

S1/S28; Head S28/0.55

Objectives:

10x/0.30 HC PL FLUOTAR WD 11 mm
40x/1.30 HC PL APO Oil CS2 WD 0.24mm
63x/1.40 HC PL APO Oil CS2 WD 0.14mm
20x/0.75 HC PL APO Imm Corr (oil, water, glycerol) CS2 WD 0.68 mm

Dichroic(s):

SP8 LIAchroics Compact RGB

Detectors:

Three channels - two PMTs, one HyD - high sensitivity Hybrid Detectors - | PMT1 | PMT2 | HyD1
All spectral detectors (AOTF)
Motorized transmitted light detector

Computer:

HP Z420 Workstation, Windows 7-64 bit, LAS X with LAS X Dye Finder and LAS X 3D Visualisation

Konfokales Laser-Scanning-Mikroskop Leica SP8 (2)

Die konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie ermöglicht es durch Einsatz einer Lochblende, optische Schnittbilder mit hohem Kontrast von mehrschichtigen fluoreszierenden Präparaten zu erzeugen. Daher ist es möglich, aus einer dicken Probe (bis ca. 100 μm) eine dünne Präparatschicht abzubilden, die unter Idealbedingungen einer Schichtdicke von weniger als 500 nm entspricht.

Das CLSM SP8 (2) auf Basis des DMi8 CEL Compact erlaubt eine punktgenaue Detektion von Fluorophoren in unterschiedlichen Medien. Die Aktivierung der Fluorophore erfolgt über Didodenlaser bei 405, 488, 552 oder 638 nm und erlaubt somit eine Anregung der gängigen Fluroreszenzfarbstoffe. Die Detektion erfolgt über zwei konventionelle Photomultiplier (PMTs) bzw. einen extrem sensitiven Hybriddetektor (HyD), welcher Elemente eines PMT mit einer Avalanche-Photodiode kombiniert.

Das System ist optimiert für Konfokalmikroskopie-Aufnahmen und Färbungen mit gängigen Fluorophoren (DAPI, Alexa488, Alexa555/Cy3, Alexa648/Cy5 o.Ä.) und liefert hier hervorragende Resultate mit weitgehend automatisierten Einstellungen.

Dieses System ist mit seinem Touchscreen und der vergleichsweise simplen Ausstattung einfach zu bedienen und verfügt über sehr stabile und anregungsstarke Diodenlaser, welche auf die vorgegebenen Wellenlängen limitiert sind. Die Immersionsobjektive sind für Ölimmersion ausgelegt. Die klassische Lichtmikroskopie ist an diesem System aufwändiger, da Objektiv, Blenden- und Filterwechsel von Hand erfolgen. Das System verfügt über keine Inkubationskammer.

Detaillierte Spezifikationen CLSM Leica SP8 (2)